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簡要描述：TUNEL檢測實(shí)驗(yàn)細(xì)胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時抽提DNA進(jìn)行電泳檢測，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。
更新時間：2022-12-22瀏覽次數(shù)：1242相關(guān)文章
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TUNEL檢測實(shí)驗(yàn)原理
細(xì)胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時抽提DNA進(jìn)行電泳檢測，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素 (FITC) 標(biāo)記的dUTP (fluorescein-dUTP) ，從而可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測，這就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法檢測細(xì)胞凋亡的原理。
TUNEL檢測實(shí)驗(yàn)切片
TUNEL檢測（石蠟切片） | 取下適當(dāng)?shù)男迈r的組織塊固定于4%-10%濃度的多聚甲醛或中性甲醛中，甲醛與組織塊體積比在10:1和20:1之間，4攝氏度保存運(yùn)輸； |
TUNEL檢測（冰凍切片） | 取下的新鮮組織應(yīng)立即放入超低溫冰箱或者液氮中，用干冰運(yùn)輸，固定好的切片應(yīng)于-80或者-20度保存，并盡快用于檢測； |
TUNEL檢測（細(xì)胞爬片） | 細(xì)胞爬片4%多聚甲醛4度固定30min，換PBS緩沖液4度保存運(yùn)輸，盡快用于檢測； |
熒光法需要先拍一張凋亡熒光圖，再拍一張?jiān)蝗竞藞D，再合并圖層，終我們提供的為三張熒光圖片。
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